期刊简介
本刊是由中国实验动物学会主办的国家级学术期刊。主要刊载有关实验动物和动物实验的理论专著、科研成果论文、科学实验新方法、新材料、实验动物新资源开发、新的动物品系的培育和应用以及实验动物有关的其他学科的科学论述。读者对象：农牧渔业、医学、药学、环保、生物、体育、国防等单位的科技工作者、管理人员以及有关的生产者、大专院校学生等。
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首页>中国比较医学杂志
- 杂志名称：中国比较医学杂志
- 主管单位：中国科学技术协会
- 主办单位：中国实验动物学会，中国医学科学院医学实验动物研究所
- 国际刊号：1671-7856
- 国内刊号：11-4822/R
- 出版周期：月刊
期刊荣誉：中国科技论文统计源期刊期刊收录：维普收录(中), 国家图书馆馆藏, 统计源核心期刊(中国科技论文核心期刊), 知网收录(中), 北大核心期刊(中国人文社会科学核心期刊), 万方收录(中), 上海图书馆馆藏
可调控性 uPA 诱导表达系统的构建及功能鉴定
陈丽香；周晓静；刘文文；周文江；任晓楠；于士颜；周晓辉
关键词：可调控肝脏损伤, ALB, uPA, 肝脏人源化小鼠
摘要：目的：构建可调控性尿激酶型纤溶酶原激活物（ urokinase－type plasminogen activator ，uPA）诱导表达系统并进行相关鉴定，可为进一步构建可诱导型肝脏人源化uPA－SCID动物模型奠定基础。方法可调控性uPA诱导表达系统即在强力霉素（ doxycycline ，Dox）诱导下通过tet－on系统调控uPA表达。为此，需要构建两个重组质粒，分别为pLNHXO1O2－Alb－GLUC－FMN2A－rtTA和pLNHXO5O6－TRE2－uPA－IRES－ZsGreen，前者引入Gaussia荧光素酶（gaussia enzyme fluorescent element，Gluc）与四环素反式激活因子（reverse tetracycline transactivator，rtTA）偶联表达，以便于监测rtTA表达水平；后者同时偶联表达ZsGreen，以便于用荧光显微镜观察基因表达。重组逆转录病毒载体进行表达功能鉴定后，将构建质粒与病毒包装衣壳蛋白VSV－G质粒共转染GP2－293包装细胞系后获得具有感染能力的病毒颗粒，利用该病毒感染NIH／3T3细胞，并用G418筛选出阳性细胞；期间各取部分细胞，使用PCR方法鉴定其基因组内是否含有相应基因转录调控本。结果成功构建 pLNHXO1O2－Alb－GLUC－FMN2A－rtTA 和pLNHXO5O6－TRE2－uPA－IRES－ZsGreen 克隆。功能鉴定显示， pLNHXO1O2－Alb－GLUC－FMN2A－rtTA 克隆可表达rtTA；pLNHXO5O6－TRE2－uPA－IRES－ZsGreen克隆转染HepG－Tet－on细胞，加Dox可诱导uPA表达。包装病毒感染NIH／3T3细胞后通过G418筛选获得单细胞克隆，通过PCR方法鉴定表明其基因组内含有相应转录本，从而成功构建uPA诱导表达稳定细胞株。结论本研究初步建立了可调控性uPA诱导表达系统，从而为可诱导肝损的uPA－SCID转基因小鼠的构建及在此基础上的肝脏人源化动物模型的建立奠定了基础。
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